检测人成纤维细胞增殖的XTT比色法

利用3种不同来源的成纤维细胞(大鼠肾上皮细胞,人胎肺成纤维细胞,人成纤维细胞)的活细胞线粒体脱氢酶在电子偶联剂硫酸酚嗪甲酯（phenazine methosulfate, PMS）的协同作用下,还原四氮唑复合物(XTT)形成可溶性的棕黄色甲簪（formazan）产物,测定细胞甲簪的生成量来反映细胞的生长与活性状态,并与传统的四甲基偶氮唑盐(MTT)方法作比较.结果表明,XTT方法直接测定水溶性的甲簪产物,敏感度高于MTT法,具有操作简单、快速、灵敏度高、结果准确的优点,为成纤维细胞的研究建立了新的检测方法.     

大血藤黄酮类化合物的提取与分析

大血藤 ( Sargentodoxa cuneata)隶属大血藤科大血藤属 ,大血藤科为我国所特有[1] 。大血藤为落叶木质藤本 ,长达 1 0 m,生于林中、灌丛或山沟 ,海拔为 40 0～ 1 90 0 m,根和藤可入药 ,有强筋骨、活血散瘀、止痛、通经之效 ,并可治疗阑尾炎、风湿性关节炎等 ,又可用作杀虫剂 [2 ]。有关大血藤次生代谢产物的研究国内外较少 :Rmoker等分离了大血藤的三萜类皂素如儿茶素等 ,并发现在体内具有明显的抗病毒效应[3 ] ;Han等证实了大血藤还含有较多的木质素 ,具有较强的抗氧化及防癌作用[4] 。黄酮类化合物是植物中非常重要的一类次生代谢产物 ,…     

大血藤叶片生化成分的动态变化

对自然条件下大血藤叶片生化成分的动态变化进行了研究。结果表明;大血藤叶片可溶性糖,淀粉和总糖含量的动态变化有相同的趋势。在叶片生长季节早期含量较低。随着叶片的生长发育,其含量逐渐上升。至8月达到最大值后逐渐下降,叶片总糖含量与日均净光合速率的季节变化呈极显著的正相关,在整个生长季节中,可溶性糖含量比淀粉高,大血藤叶片总蛋白含量季节性变化呈单峰曲线,在展叶初期含量较低;随后迅速上升,至8月达到最大值后逐渐下降,叶片总糖含量与日均净光合速率的季节变化呈极显著的正相关。在整个生长季节中,可溶性糖含量比淀粉高。大血藤叶片总蛋白含量季节性变化呈单峰曲线,在展叶初期含量较低;随后迅速上升,在6月初达到最大值后逐渐下降,落叶前降至最低占,可溶性蛋白质含量的季节性变化曲线与总蛋白含量基本相似,DNA含量在叶生长初期大幅度上升,至6月达到高峰后迅速下降,以后基本趋向稳定,RNA在叶生长初期有所上升,峰值也出现在6月,以后缓慢下降,到9月降至最低值,在落叶前又有所回升,总核酸含量的季节变化与RNA变化相似,RNA/DNA比值在生长季节中出现3次高峰,大血藤叶片总黄酮含量季节性变化呈“双峰”型,第1高峰期在开花期的5月。第2高峰期在秋季的9月份。     

Senescence-like changes induced by expression of p21~(Waf1/Cip1) in NIH3T3 cell line

P21Waf1/Cip1 is a potent cyclin-dependent kinase inhibitor. As a downstream mediator of p53, p21Waf1/Cip1 involves in cell cycle arrest, differentiation and apoptosis. Previous studies in human cells provided evidence for a link between p21Waf1/Cip1 and cellular senescence. While in murine cells, the role of p21Waf1/Cip1 is indefinite. We explored this issue using NIH3T3 cells with inducible p21Waf1/Cip1 expression. Induction of p21Waf1/Cip1 triggered G1 growth arrest, and NIH3T3-p21 cells exhibited morphologic features, such as enlarged and flattened cellular shape, specific to the senescence phenotype. We also showed that p21Waf1/Cip1-transduced NIH3T3 cells expressed β-galactosidase activity at pH 6.0, which is known to be a marker of senescence. Our results suggest that p21Waf1/Cip1 can also induce senescence-like changes in murine cells.     

鼠透明带3(ZP3)融合蛋白表达以及抗血清制备

鼠透明带3（mZP3)作为精子的初级受体,是鼠透明带中的一种主要糖蛋白,抗鼠透明带3抗体能够阻断精卵的结合,达到不育的效果,因此mZP3是免疫避孕研究的重要候选抗原。从小鼠卵巢中提取总RNA,分离mRNA,反转录获得cDNA,将cDNA连接到测序载体pUCm-T质粒上,通过序列测定和分析得到正确的mZP3 cDNA。经内切酶EcoR I和XhoI处理,将mZP3 cDNA克隆至融合蛋白表达载体pGEX-4T-1中,在T4 DNA连接酶的作用下构建融合表达载体pGEX-mZP3,转化大肠杆菌BL－21菌株,利用IPTG诱导后获得可溶性的蛋白质产物,经过SDS－PAGE鉴定,表达的融合蛋白GST－mZP3分子质量约为72kD左右,纯化的融合蛋白免疫兔子,获得效价为1：1000的抗血清,Western blot检测抗血清具有针对mZP3融合蛋白的专一性,为进一步开展mZP3的免疫功能检测的研究奠定 了基础。     

利用RAPD技术分析实验用比格犬的遗传背景

目的　运用RAPD技术对实验用比格犬 (Beagle)进行遗传背景分析。方法　筛选的 16个RAPD引物对 4 0个样品的分析 ,共得到 93个扩增条带。结果　所有样品的相似系数 80 4 %到 10 0 %间变动 ,平均相似系数为93 2 8% ,聚类分析得到了这些个体的同源树资料。结论　本遗传背景资料可以为以后的比格犬繁育生产和生物医药学的研究应用提供技术指导     

鱼类抗冻蛋白的研究进展

抗冻蛋白 (AFP)可非依数性地降低溶液冰点 ,对冷冻细胞和胚胎具有高效的保护作用。目前的研究表明 ,不同的鱼类抗冻蛋白尽管都具有降低冰点的活性 ,但在结构和组成上又存在有较大的差异。根据其结构和化学组成 ,一般将它们分为 4大类 :AFP I、AFP II、AFP III和AFP IV。抗冻蛋白的编码基因为基因组中多拷贝基因家族的成员 ,其基因表达在很大程度上要受到季节变化的影响。目前 ,普遍使用吸附抑制假说来解释AFP非依数性降低溶液冰点的分子机制 ,但不同类抗冻蛋白在降低溶液冰点时的作用模式却不尽相同。现就鱼类的 4类抗冻蛋白的结构组成、基因性质、抗冻机制及其在细胞和胚胎冻存中的作用等领域的研究进展进行概括性综述     

通过获得链霉素抗性基因突变株筛选小诺霉素高产菌株

通过链霉素对小诺霉素产生菌 (Micromonospora purpura) 49 1 2 #菌株孢子致死浓度的测定 ,采用诱变剂EMS 3种不同诱变剂量对菌株的孢子进行诱变处理 ,诱变处理的孢子涂布在含链霉素致死浓度的改良高氏平板上 ,获得大量的链霉素抗性基因突变株 ,然后从链霉素抗性基因突变株进一步筛选小诺霉素高产菌株 ,获得小诺霉素菌株 49 1 2 3菌株。在摇瓶条件下 ,其产小诺霉素生物活性单位比出发菌株 49 1 2 #的摇瓶发酵单位提高了 40 %以上。小诺霉素的组分比由出发菌株的C2b∶C1a的 5∶5提高到 8∶2。C2b有效组分提高了 30 %;链霉素抗性基因突变与小诺霉素发酵单位突变之间 ,小诺霉素正突变率达到 40 %,负突变率达 2 6%,正突变大于负突变     

缺血性脑卒中患者同型半胱氨酸代谢相关酶基因突变的研究

为研究同型半胱氨酸代谢相关酶亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T和胱硫醚-β-合成酶(CBS)基因T833C位点碱基突变与缺血性脑卒中的关系,对74例缺血性脑卒中患者和83例健康对照者,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测MTHFR基因C677T基因型,用扩增阻滞突变体系法(ARMS)检测CBS基因T833C突变。实验检出患者组MTHFR基因T纯合基因型、杂合基因型和T等位基因频率分别为2.7％、51.4％和28.4％,对照组分别为1.2％、39,8％和21.1％。患者组CBS基因C纯合基因型和C等位基因频率分别为13.5％和43.9％,对照组分别为6.0％和38.0％。Multiple Logistic Regression分析显示;C677T位点T等位基因,T833C位点C等位基因以及年龄均与缺血性脑卒中发病有关(P<0.05),C677T位点T等位基因的比值比(OR)为1.74(95％CI 1.06～2,B6)和T833C位点C等位基因的比值比为1.73(95％CI 1.07～-2.81)。实验显示MTHFR C677T和CBS T833C基因位点突变与缺血性脑卒中发病有关,上述两个基因位点突变可能是缺血性脑卒中发病的遗传因素。     

重组人载脂蛋白A-Ⅰ在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的高表达

高密度脂蛋白(High-density Lipoprotein,HDL)是血浆中重要的脂蛋白,其主要成分为载脂蛋白AⅠ(Apoliprotein AⅠ,ApoAⅠ为了大量制备该蛋白,首先尝试利用Pichia pastoris表达系统高效表达ApoAⅠ。通过PCR扩增获得天然含人载脂蛋白ApoAⅠ的基因片段,将其插入到P．pastoris分泌型载体pPIC9K上,BglⅡ酶切线性化后电转化P．pastoris GS115,将获得的1000多个转化子依次在含不同G418浓度的YPD平板筛选高抗性转化子,得到的22个高抗性转化子经甲醇诱导,SDS-PAGE检测得到6株高表达菌。然后对其中的高表达菌株AP16的培养及诱导条件进行了优化,结果显示：接种后培养24～28h,转入诱导阶段,培养基pH值在7—7．5,菌体密度OD600=80左右,以1％甲醇诱导96h最有利于ApoAⅠ的表达,表达水平达160mg／L。14L发酵罐结果显示表达水平与摇瓶相当,均高于其它表达系统,为大批量制备奠定了基础。